高效液相色譜儀的原理是利用不同待分離物質(zhì)在兩相中的親和力差異，如分配系數(shù)、吸附容量等。利用外力，含有樣品的流動相（氣體、液體）通過固定在柱或平板上的固定相表面，該固定相與流動不相溶。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，混合物中的組分與固定相相互作用。
液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題很有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
為了保證高效液相色譜儀使用的穩(wěn)定性，我們對于設(shè)備使用環(huán)境是有一定要求的，包括：通風(fēng)、照明、供電、環(huán)境溫度和濕度以及潔凈度，其中：
1、通風(fēng)：使用液相色譜儀分析過程中，由于流動相中含有揮發(fā)性有機溶劑會產(chǎn)生有害氣體，對儀器中的光學(xué)元件帶來腐蝕，應(yīng)注意儀器室的通風(fēng)，以排除室內(nèi)有害氣體、保持空氣清新。通風(fēng)主要有兩種方式：一種自然通風(fēng)，定時打開門窗，讓內(nèi)外空氣對流；另一種是強制通風(fēng)，如用通風(fēng)柜、排風(fēng)扇等，及時將有害氣體排出室外；
2、照明：室內(nèi)照明要光線適中，避免陽光直射。為避開直射光線對儀器操作、觀測的影響，儀器（顯示屏）應(yīng)側(cè)向光線。實驗室窗戶要掛窗簾，以便隨時調(diào)節(jié)光照強度；
3、供電：液相色譜室應(yīng)設(shè)有照明電源和動力電源，動力電可供儀器運行使用。為減少噪音的干擾，產(chǎn)品應(yīng)遠離瞬時供電的大功率電器設(shè)備，如大型電動設(shè)備、電梯、空調(diào)系統(tǒng)等。為保證HPLC輸液泵的精度，必須要保證穩(wěn)定的輸人電壓，為此，建議色譜室應(yīng)設(shè)有和儀器負荷相當(dāng)?shù)姆€(wěn)壓電源；
4、環(huán)境溫度和濕度：適宜的溫度和濕度是保障HPLC儀正常運行、性能穩(wěn)定的必要條件。一般要求室溫在20一30℃之間，日溫度變化2一3℃，不要波動太大，否則，在開機分析時會影響色譜分離，夏季一定要控制室溫不要超過30℃，溫度太高會使流路系統(tǒng)產(chǎn)生氣泡，影響檢測器的正常工作。室內(nèi)相對濕度應(yīng)控制在60%以下；
5、潔凈度：懸浮于空氣中的顆粒物質(zhì)會對色譜儀器分析帶來干擾，使本底和噪聲升高，成為分析測試的污染源，直接影響高純物質(zhì)的純度與痕量雜質(zhì)的分析。
