高效液相色譜分析柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜分析柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對(duì)于同系物分析，只要500即可；對(duì)于較難分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子，因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
色譜分析柱柱材料：
該柱管常采用內(nèi)壁經(jīng)過(guò)精密加工拋光的不銹鋼管，以獲得高柱效。不銹鋼管耐溶劑、水和緩沖溶液的腐蝕，使用前色譜柱管先用Trichloromethane、甲醇和水依次清洗，再用50%的hno3對(duì)柱內(nèi)壁作鈍化處理。鈍化時(shí)使hno3在色譜柱管中至少滯留10min，以在柱內(nèi)壁形成鈍化的氧化物涂層。
柱管也采用氟塑料、玻璃和玻璃襯里材料，主要是從抗腐蝕和易加工方面考慮。
保證高效液相色譜分析柱的性能和壽命：
1、認(rèn)證閱讀使用說(shuō)明書(shū)
2、使用填充良好的色譜分析柱。
3、使用保護(hù)柱及在線過(guò)濾器。
4、經(jīng)常以強(qiáng)溶劑沖洗色譜分析柱。
5、色譜分析柱使用溫度*小于400C。
6、盡量減少壓力波動(dòng)，避免機(jī)械及熱沖擊。
7、在水流動(dòng)相與緩沖濃液中加200ppm的疊氮鈉。
8、充分過(guò)濾樣品及流動(dòng)相，盡量避免雜質(zhì)微粒與保強(qiáng)留分成。
9、過(guò)夜或儲(chǔ)存時(shí)，沖洗掉鹽和緩沖液，用純有機(jī)溶劑流動(dòng)相保存。
10、硅膠基質(zhì)的的色譜分析柱，應(yīng)保持流動(dòng)相的PH值范圍在3.0~8.0。
11、流動(dòng)相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意應(yīng)95∶5的水及有機(jī)溶劑過(guò)渡，有機(jī)溶劑不能低于5%。
